當前位置:首頁 » 圖片知識 » 如何拍免疫組化圖片
擴展閱讀
女生和渣男搞笑圖片 2023-08-31 22:07:09
嘻嘻長什麼樣圖片 2023-08-31 22:06:10

如何拍免疫組化圖片

發布時間: 2023-01-07 09:22:30

㈠ cellsens dimension 軟體在免疫組化照相時候怎麼將標尺顯示在圖片(保存的圖片)上求大神指導..

保存圖片時,以.jpg的格式保存就好了

㈡ 免疫組化圖片如何加標尺

保存圖片時,以.jpg的格式保存就好了。

免疫組化,是應用免疫學基本原理抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理。

通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及相對定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。

標尺是光學計量儀器的長度標准,它廣泛應用於測量長度的儀器中,如工具顯微鏡、測長儀、測量機等。第一機械工業部已制定了玻璃標尺的標准,以供選擇時參考。

㈢ 免疫組化照片怎樣剪裁,就是發表文章時,怎樣處理自己拍下來的免疫組化照片

一切以能客觀展示你的實驗結果為基礎,有的科研工作者採用局部放大,疊加照片(整體照片放大倍數正常,局部照片放大倍數高)的形式進行展示,也是一個不錯的展示方法。

下圖是義翹的典型IHC結果,可以作為參考。祝順利

㈣ 2020-09-07 免疫組化組圖

好不容易組了一個16張圖的組化,保持清晰度的同時,亦要方便後面調整。使用PS心得如下:
1.之前顯微鏡拍攝的圖片一定要命名好樣本的類型、組別名稱、放大倍數、部位、統一拍攝像素;
2.使用的是leica明場顯微鏡,首選儲存使用TIFF格式,方便以後調整,一開始我使用jpeg貪圖文件較小,其實後期不方便PS調整,因為jpeg壓縮導致丟失過多的細節,後期基本用不了;
3.選出需要上圖的照片,PS上裁剪成大小固定的一張張圖片,我統一將400倍的照片裁剪成13.5cm X 13.5cm格式,調節曝光、色相、對比度、飽和度等與同組的照片一致的色彩,另存為到新的工作文件夾中,然後重命名原始文件,標記上「已使用」,這點非常重要,否則時間長了,重復使用圖片被發現是學術不端行為;
4.PS新建目標SCI雜志要求的畫板大小(17cm寬,高不超過22cm),上圖,編排好順序,如果不同部位的色彩差太遠,可以「圖像--調整--匹配顏色」;
5.組好之後,保存成.psd,方便以後調整,圖片數據不會丟失。將畫板大小調整合適,輸出一張tiff格式的組合照;
6.下一步就是將tiff導入AI進一步組合柱狀圖及標出名稱分組等信息了。
類似如下圖的樣式:

㈤ 如何用imagej分析免疫組化平均光密度值

1、打開Image-Pro Plus 6.0軟體,點擊右下方的Done。點擊file,點擊open,打開你要選擇組化圖片,點擊打開,得到如圖所示。

㈥ Image pro-Plus6.0軟體處理免疫組化半定量時,怎麼拍照,病理科的顯微鏡上能直接拍照么,求大俠指點

聽起來,樓主的圖像處理軟體不負責拍照,也不具備拍照功能。樓主只要看清楚它能夠識別哪些格式的圖像文件即可。
顯微鏡上拍照完全可能,此類的配置在實驗室與病理科也很常見,但我怎麼知道樓主所說的那一台是否安裝有相機呢??

㈦ 免疫組化IPP分析

1.圖片來源。DAB顯色的免疫組化圖片

2.輸出的結果。

3.光密度(OD)反映蛋白的量。

灰度值:黑0----白255。

步驟

1.光密度校正。具體步驟很容易查到。

2.設置測量參數。 area 和IOD

面積過濾值=100

顯示選項中:

 NO fill holes, smooth=2, 

3.保存測量環境文件

4.手工描繪測量區域

5.選擇色彩。選擇HSI

H:0-29

S:不動

I:MAX=光密度校正的背景值相同(靠近255一端)

根據圖片的顯色,可以適當微調HSI

最後保存選色文件。file-save-

6.設置數據收集器

image----name

count/size----area(---sum) and  IOD(---sum)

7.測量

測量選擇區域面積:edit-count aoi to objects

在data collector中讀取測量數據

然後,delete 測量

重新點AOI自主描繪窗口工具,之前畫的框就會自動出現

點擊count---在data collector中讀取測量數據

8.數據整理

同一樣品不同視野的結果取均值=一份樣品的結果

同一處理組的不同樣品的結果進行統計分析。

1.圖片的拍攝條件不能變。相同光亮,相同放大倍數,相同曝光條件。

2.不能使用自動拍照功能,必須手動拍照。

3.曝光條件。將空白區域調整到視野中央,通過曝光,使灰度值在230左右,然後校正白平衡,使它顯示純白色。

㈧ 此圖片是免疫熒光還是免疫組化出來的結果文章原文是如下描述的。

後面兩個圖顯然是組織免疫熒光,用EET處理後黑色素瘤細胞轉移至肺,肝,腎,取肺和肝的組織,切片後(可能是冰凍切片),直接在熒光顯微鏡下觀察拍照。由於GFP自帶綠色熒光,在熒光顯微鏡下,直接可以見到轉移的GFP標記的黑色素瘤細胞。

㈨ 免疫組化原理、流程及結果分析

免疫組化原理
免疫組化染色是用一抗與被檢測組織中目的蛋白抗原結合,然後用HRP等標記的二抗與一抗進行結合,最後通過與DAB顯色劑反應,進而確認所要檢測蛋白抗原的定位、半定量等目的。
免疫組化更多的意義在於查看目的蛋白的定位。定量一般用western來實現。

免疫組化染色和HE染色的不同之處可能是HE染色比較粗略地辨認不同細胞形態學改變;而後者能夠針對特異性細胞標志物來檢測特異性細胞的改變(數量)、也可檢測細胞內細胞因子的轉位,組織中一些特異性蛋白的表達的量改變(通過圖像分析系統分析顏色深淺、分布的面積等綜合分析)。
通俗的講,HE僅僅是看大體病理改變,比如組織壞死,比如炎性滲出。免疫組化,看你的目的蛋白的表達情況。

免疫組化和****HE****染色的對比
DAB和HE一樣也是一種染色劑,HE染色相對簡單,能分辨出細胞中的嗜酸嗜鹼性物質;DAB染色全稱應該叫做免疫組化DAB染色,經過一系列復雜的生化反應後,DAB(二氨基聯苯胺)染色劑能將辣根過氧化物酶染成棕色。

常用的免疫組化染色方法:
組化用HRP的話,信號不夠強。通常用生物素標記HRP來增強信號。
1、 ABC法(卵白素-生物素-過氧化物酶復合物法)
ABC法是利用卵白素與生物素特有的高度親和力特性,與生物素化二抗結合,形成抗原+特異性抗體+生物素化二抗+卵白素+生物素+HRP復合物,最後DAB顯色。
復合物配製:先將生物素與酶結合,形成生物素化HRP,以生物素化HRP與卵白素按一定比例混合,形成卵白素-生物素-過氧化物酶復合物。
2、 SP法(抗生物素蛋白鏈酶素-過氧化物酶復合物)
本身沒有連接生物素,但有兩個生物素親和力極高的結合位點,可以與二抗上的生物素結合,敏感性高,復合物不需要使用前混合,更為簡便。
3、 PAP法
4、 直接法

樣本制備

免疫組化結果分析
免疫組化結果的判斷原則:
1 、必須設陽性對照和陰性對照。
2 、 抗原表達必須在特定部位。
3 、 陰性結果不能視為抗原不表達。

免疫組化染色實驗組與對照組結果分析表

從表可以看出只有6、7實驗結果有意義。1-5均因對照組的結果已否定Ab的特異性或IHC技術操作存在錯誤等而使實驗結果失去意義,必須重復實驗或換用Ab。

染色失敗的幾種情況及原因:
1、 所染的全部切片均為陰性結果,包括陽性對照在內。
2、 所有切片均呈陽性反應。
3、 所有切片背景過深。
4、 陽性對照染色良好,檢測的陽性標本呈陰性反應。

所有切片呈陽性反應,其原因:
1、 切片在染色過程中抗體過濃,或乾片了。
2、 緩沖液配置中未加氯化納和PH值不準確, 洗滌不徹底。
3、 使用已變色的呈色底物溶液,或呈色反 應時間過長。
4、 抗體溫育的時間過長。
5、 H 2 O 2 濃度過高,呈色速度過快且粘附劑太厚。

所有切片背景過深,其原因:
1、 內源性過氧化酶沒有完全阻斷。
2、 切片或塗片過厚。
3、 漂洗不夠。
4、 底物呈色反應過久。
5、 蛋白質封閉不夠或所用血清溶血。
6 、使用全血清抗體稀釋不夠。

陽性對照染色良好,檢測的陽性標本呈陰性反應。
最常見的原因:標本固定和處理不當。

注意事項:
1、 蘇木素復染時間需要摸索,尤其要考慮陽性染色的位置。
2、 切片脫蠟和水化要充分;加反應液時要覆蓋組織充分;每次加液前甩乾洗滌液,但又防止乾片。
3、 以下原因可能導致片子著色不均勻:
①脫蠟不充分。可以60℃烤20min,立即放入新鮮的二甲苯中。
②水化不全。應經常配製新鮮的梯度乙醇。
③抗體沒混勻。用移液器充分混勻一抗/二抗等試劑。④抗體孵育時,切片放傾斜。
⑤抗體孵育後PBS沖洗不充分。
⑥製片厚薄不均勻等問題。
⑦染片盒不平,切片傾斜。
4、 一抗的清洗:
1、單獨沖洗,防止交叉反應造成污染。
2、溫柔沖洗,防止切片的脫落,推薦用浸洗方式。
3、沖洗的時間要足夠,才能徹底洗去 結合的物質。
5、 PBS的PH和離子強度的使用:
1、建議PH在7.4-7.6濃度是0.01 M。
2、中性及弱礆性條件(PH7-8)有利 於免疫復合物的形成,而酸性條件則有利於分解;低離子強度有利於免疫復合物的形成,而高離子強度則有利 於分解。
6、 拍照:
1、有條件的話應該立即拍照,若不能及時拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。

㈩ ImageJ 如何除去鏡頭等設備造成的免疫組化圖片背景干擾

在日常科研中,我們經常會遇到儀器使用時間過長後,拍出來的組化片子背景中有各種陰影(如下圖中右側陰影)

同時我拍了一張沒有組化片子的純背景圖,也可以看到右側確實有明顯的陰影。

其實有很多工具可以達成目的,我這篇文章主要集中在ImageJ如何操作可以消除背景中的陰影。

打開image J,依次點擊process-calculator plus,然後按照下圖進行設置,圖1位置放染色的片子,圖2位置放拍的背景圖,然後點擊OK,就可以完成操作了

下面放上最後的結果圖